双面妖精

比古清十郎

「飛天御剣流」の第十三代目継承者であり、剣心の師匠。“比古清十郎”とは隠し名であり、人付き合いを避けるため、新津覚之進という陶芸家として京都の山奥に暮らしている。 自らの才覚に自信があり、言動にもそれが表れている。

緋村剣心

温和な雰囲気が漂う放浪の剣客。その正体は、神速の殺人剣「飛天御剣流」により「人斬り抜刀斎」と恐れられた幕末の志士。赤毛と頬の十字傷が特徴で、腰には峰と刃が逆の「逆刃刀」を差している。

斎藤一

剣心の幕末時代からの宿敵。かつては、幕府側として京都を守護していた新撰組の三番隊組長。維新後は、藤田五郎と名乗り、警部補として奉職しながら、警視庁の密偵としても暗躍している。

沖田総司

清里明良

雪代縁

雪代巴

在明治维新中对剑心影响最大的一位女子。

志々雄真実

桂小五郎

日本政治家，长州藩出身，曾拜吉田松荫为兄，从斋藤弥九郎学习剑术，向江川英龙学习西方军事学。在尊攘、讨幕运动中起领导作用，维新后参加起草《五条誓约》，是政府的核心人物，推进奉还版籍、废藩置县，与西乡隆盛、大久保利通一起被称为“明治维新三杰”。

明神弥彦

東京府士族出身の少年。両親を亡くして天涯孤独の身となり、ごろつきに拾われスリとして働かされていたが、剣心と出会うことで誇りを取り戻す。剣士として強くなるために神谷道場の門下生となる。

相楽左之助

裏社会に名を轟かせる喧嘩代行を生業とする男。通称喧嘩屋“斬左“。依頼を受けて喧嘩をするが、戦って楽しい相手を常に探している。人並外れた怪力と打たれ強さ、背中の悪一文字が特徴。

三条燕

牛肉鍋の店「赤べこ」の店員をしている少女。一人称は「私」。弥彦の良き理解者的存在。おどおどとした少し気弱な性格で、縁があって弥彦や剣心たちと出会う。初期では弥彦を「ちゃん」付けで呼ぶ癖があった。後に人誅によって生気を失っていた剣心を、鯨波に立ち向かう弥彦を助けて欲しいと必死で呼びかけることで復活させる役目を果たす。東京府出身。好きな人:優しい人。 素性は元旗本だった士族・長岡家に仕える家臣の娘。その関係で長岡幹雄に目をつけられ、赤べこから金を奪うための刺客として送り込まれた。逆らえば赤べこの人間全員を殺すと脅され、断ることができなかったが、長岡幹雄は弥彦によって倒され、薫からもいつまでもビクビクおどおどしていてはいけないと告げられ、強い女の子になることを誓った。以降は弥彦を「君」付けで呼ぶ。 後に弥彦と結婚、息子（心弥）を授かる。その時期においては赤べこ勤務時にメイド服を思わせる新制服を着用していた。明治15年のころは、弥彦以外に由太郎からも口説かれていたらしい。 錦絵収集が趣味である。 『明日郎 前科アリ』ではラストに登場。『北海道編』では道場で留守を守ることになった弥彦に同居を申し込まれる。 アニメでは弥彦と出会った経緯が描かれており、弥彦が川原で剣術の修行中に鼻緒が切れたため、それを直してあげたのが縁となっている。弥彦も燕に恋愛感情を見せるなど本編以上に恋愛要素が強く描かれている。また、あやめ・すずめ（アニメオリジナルキャラクター）とも知り合いである。薫とは長岡幹雄との一件で知り合うことになるが、アニメではそれよりも早く顔見知りという設定。 作者曰くデザインのモチーフは某人気アニメの土星の戦士。 完全版第19巻の再筆：変形おかっぱ頭に燕柄の着物は私服。制服の代わりに前かけに赤べこ印がプリントされている。不埒な客対策として、赤べこ名物「樫のお盆」を持っている。メイド服バージョンもあり。 キネマ版：弥彦の幼馴染という設定。

山県有朋

かつて剣心と共に幕末を生き抜いた長州派維新志士。一人称は「俺」もしくは「私」。現在は明治政府の陸軍卿（後年、陸軍のみならず政官界の大御所として隠然たる権勢を揮う）。礼儀正しい印象の人物。剣心が東京に現れたという話を聞き、陸軍の将軍に招こうとするが、断られた（アニメでは剣心たちの去り際に内心「諦めんぞ」と執着を見せる発言をしていた）。原作では人誅編の剣心の回想で山県狂介と名乗っていた若き日の姿が登場した（このころは「抜刀斎」に対してあまり良い印象はなかったようである）だけだが、アニメ版では何度か登場し、劇場版でも登場する。風水編では独断で自身の近衛大隊を率いて事件現場に駆け付けるも徒労に終わり、謹慎処分を受けた。

神谷越路郎

本編では故人扱い。薫の父で、神谷活心流創設者。西南戦争に従軍するも戦死したとされていた。 アニメ版では比留間伍兵衛が門下生になっており、他の門下生を傷つけ、自分にも刀を向けた彼の右親指を砕いて破門とし、剣を使えなくした。このことから伍兵衛に強い恨みを買っていた。 銀幕草紙変では西南戦争において斎藤と同じ隊に所属していた。また、戦いにおいては常に峰打ちで相手を殺さないように心掛けていた。 単行本3巻に収録された連載前のパイロット版『るろうに〜明治剣客浪漫譚〜』では幕末時代の「抜刀斎」と知り合いであり、剣の腕は日本で一番強いと賞賛していた。「流浪人」にも「人の良いあの人」と評されている。一方で剣の腕は「娘」の恵（本作品では薫、弥彦との神谷三姉弟という設定）から見ても「それほど強くは…」と語られている。一方で弥彦は「一番強い『人斬り抜刀斎』の次に強かった!」と信じている。 『北海道編』の第1話にて函館で半年前に撮られた写真に写り込んでおり、生存の可能性が浮上する。剣心の勧めにより薫たちは父を探しに行くこととなる。

瀬田宗次郎

神谷薫

神谷薰为《浪客剑心》中的女主角。薰从小就失去了母亲，父亲失踪，但她没有因为失去双亲而被击倒，反而更坚强积极面对自己的人生。以「活留口剑术─活人剑」为精神的神谷活心流之代理师父。在城内主持一家道场，有竹剑美少女之外号，可见其剑术之精湛。

四乃森蒼紫

将軍直属の諜報機関「御庭番衆」において、齢十五で御頭となった天才隠密。訳あって現在は部下を束ね、武田観柳という実業家に雇われている。

巻町操

蒼紫に恋する、男勝りで感情豊か、かつ我が儘な一面を持つ少女。御庭番衆先代御頭（蒼紫の師匠）の孫娘。東海道で京都に向かっていた剣心に会い、京都まで同行する。その時は路銀をなくして追剥をしていた。御庭番式苦無術と、般若譲りの御庭番式拳法を使いこなし、常人レベルを超えた実力を誇る。蒼紫の部下（御庭番衆）にも懐いていた。外見が小柄で幼児体型であるため、実年齢より年下に見られている（本人も多少気にしている）。斎藤や左之助からはイタチ娘と呼ばれる（薫が狸、恵が狐を連想させるため）が、本人は嫌っている様子（アニメでは左之助にそう呼ばれることが多い）。 京都編では蒼紫と翁が戦ったことを受けて隠密御庭番衆「御頭」を自称し、一度は蒼紫との対立も辞さない姿勢も見せた。蒼紫が葵屋に戻って以降「御頭」を自称する場面はないが、アニメ版では京都編以降も「御頭」を自称するシーンがある。 「春に桜」の時期は花嫁修業中だったらしい。 PSP『再閃』ではトンファーを武器として使っている。 名前は新潟県巻町（現新潟市西蒲区）に由来。